@MASTERSTHESIS{ 2019:230295559,
 	title = {Caracterização de células viáveis e não cultiváveis em Xanthomonas citri pv. anacardii},
 	year = {2019},
 	url = "http://www.tede2.ufrpe.br:8080/tede2/handle/tede2/9381",
 	abstract = "O cajueiro é uma planta originária do Brasil, concentrada principalmente na região Nordeste, cuja produtividade é consideravelmente afetada pela incidência de doenças. Apesar da maioria das doenças serem de etiologia fúngica, tem-se observado a ocorrência de doenças bacterianas, como a mancha angular e a mancha de Xanthomonas causadas por Xanthomonas citri pv. anacardii, em cajueiros cultivados nos estados do Ceará e Rio Grande do Norte. O principal sintoma da mancha angular são manchas necróticas escurecidas, restritas pelas nervuras do limbo foliar, enquanto no caso da mancha de Xanthomonas, os sintomas são necroses nos frutos e nas nervuras secundárias das folhas da planta. A introdução de material propagativo infectado é a principal forma de disseminação da doença entre lavouras. Os principais meios de sobrevivência relatados de X. citri são restos culturais de ciclos anteriores do hospedeiro, hospedeiros alternativos, sobrevivência epifítica, endofítica e por meio de células viáveis e não cultiváveis (viable but nonculturable - VBNC) do patógeno. Neste último caso, VBNC não são observadas em meio de cultura, porém viáveis, permitindo a sobrevivência bacteriana. Fatores ambientais adversos capazes de inibir o desenvolvimento da bactéria podem induzir o estado VBNC, que tendem a se manter em baixa atividade metabólica durante longos intervalos de tempo, porém podendo ser revertido quando em condições favoráveis para o crescimento da bactéria. Diante disso, este trabalho objetivou a caracterização de células em estado VBNC em dois isolados pigmentados (CCRMTAQ13 e CCRMTAQ18) e um isolado apigmentado (IBSBF2579) de X. citri pv. anacardii. Para esse fim, os genomas dos três isolados foram obtidos do banco de dados do NCBI, anotados e, em seguida, analisados visando a identificação de genes codificados em condição de VBNC. Para avaliar o estado de VBNC, foi obtida uma curva de crescimento bacteriano, determinando-se a fase exponencial (log) e de morte dos isolados. Essas fases foram avaliadas quantificando-se a concentração de células por meio de PCR quantitativa (qPCR) com primers construídos com base no gene relA, seguindo-se a avaliação da patogenicidade das células em estado VBNC por meio de inoculações artificiais em cajueiros. Foram identificados 13 genes relatados como expressos no estado de VBNC nos genomas dos três isolados, sendo o gene relA selecionado para as análises de qPCR. Curvas de crescimento bacteriano in vitro construídas em meio de cultura NYD permitiram a determinação da quantidade de células totais viáveis presentes nas fases exponencial e de morte para os isolados CCRMTAQ13 (24/96h), CCRMTAQ18 (48/72h) e IBSBF2579 (96/168h). A caracterização do estado VBNC em X. citri pv. anacardii ocorreu pela comparação entre a quantidade de unidades formadoras de colônias (UFC/mL) e a quantidade de cópias do gene relA/mL na fase de morte da curva de crescimento. No método de diluição seriada, na fase de morte foram obtidos 0 UFC/mL em CCRMTAQ13, 0,2 x 108 UFC/mL em CCRMTAQ18 e 0,07 x 108 UFC/mL em IBSBF2579. Através da qPCR, foram quantificadas 2,68 x 108 cópias do gene relA /mL em CCRMTAQ13, 2,38 x 108 cópias do gene relA /mL em CCRMTAQ18, e 7,34 x 108 cópias do gene relA /mL em IBSBF2579. A comparação dos dados quantitativos demonstrou valores até 100 vezes maiores nos ensaios por qPCR para a fase de morte. Para a variável período de incubação não houve interação significativa entre os isolados e as fases de crescimento, havendo diferenças significativas apenas entre as fases de crescimento (exponencial e de VBNC), com a fase LOG levando em média 1,91 dias para causar os primeiros sintomas. Para severidade, avaliada aos vinte dias após a inoculação, foi observada interação entre os isolados e as fases de crescimento, sendo o isolado CCRMTAQ18 na fase LOG, o de menor média (3,95 mm²), e o isolado IBSBF2579, a maior média (7,17 mm2). A caracterização das VBNC possibilita uma nova perspectiva para a diagnose de fitobactérias, e nesse estudo foi realizado o primeiro relato da ocorrência de VBNC em X. citri pv. anacardii, uma importante bactéria fitopatogênica para região Nordeste do Brasil.",
 	publisher = {Universidade Federal Rural de Pernambuco},
 	scholl = {Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia},
 	note = {Departamento de Agronomia}
}