@PHDTHESIS{ 2018:446566982, title = {Efeito do fator de crscimento semelhante à insulina-I (IGF-I) e do fator de crescimento e diferenciação-9 (GDF-9) sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais ovinos}, year = {2018}, url = "http://www.tede2.ufrpe.br:8080/tede2/handle/tede2/7650", abstract = "O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito do fator de crescimento semelhante à insulina-I (IGF-I) e do fator de crescimento e diferenciação-9 (GDF-9) sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais ovinos. Para isto, foram desenvolvidas três fases experimentais. A primeira fase avaliou o efeito do IGF-I sobre o cultivo in vitro de folículos secundários isolados de ovelhas. Parte dos ovários foram destinados à imunolocalização da proteína para o IGF-I. Os folículos secundários isolados dos demais ovários foram cultivados por 18 dias no meio controle (MEM+) ou no MEM+ associado de diferentes concentrações de IGF-I (10, 50 e 100 ng/mL), ou nos mesmos tratamentos adicionados de 750 ng/mL de FSH. Ao final do cultivo, foram realizadas análises de fluorescência, maturação in vitro (MIV) ou expressão do receptor de LH (LHR). A fase 2 avaliou a influência do GDF-9 no desenvolvimento de folículos pré-antrais cultivados in situ. Para isso, fragmentos ovarianos foram cultivados por 7 dias em MEM ou em MEM adicionado de GDF-9 (1, 50, 100, 200 ou 400 ng/mL). Além disso, foi realizado um segundo cultivo em MEM ou em MEM + 50 ng/mL de GDF-9, na presença ou ausência do inbidor da via PI3K. Ao final, os fragmentos foram avaliados quanto à sobrevivência, ativação, diâmetro e imunolocalização das proteínas PCNA, caspase-3 ativada e pAKT. Na fase três, folículos secundários isolados foram cultivados por 12 dias em MEM ou MEM + GDF-9 (1, 10, 50 ou 100 ng/mL). Ao final do cultivo, os oócitos foram submetidos à MIV e, posteriormente, à análise de atividade mitocondrial e ERO. Os resultados da fase 1 mostraram que 50 ng/mL de IGF-I + FSH apresentou mais oócitos totalmente crescidos (P<0,05). Os níveis de ERO foram maiores em 100 ng/mL de IGF-I + FSH comparado aos outros grupos, com concomitante diminuição do nível de GSH e atividade mitocondrial (P<0,05). Na fase 2, a sobrevivência folicular foi maior no tratamento 50 ng/mL de GFD-9 (P<0,05) comparado aos demais tratamentos (exceto 1 ng/mL), promoveu maior proliferação celular e reduziu a apoptose quando comparado ao controle, o que ocorreu através da via PI3K/AKT. Na fase 3, os folículos cultivados em 100 ng/mL de GDF-9 apresentaram maior percentagem de oócitos totalmente crescidos, MI e maior atividade mitocondrial comparado aos demais grupos (P<0,05). Em conclusão, este estudo demonstrou a presença da proteína para o IGF-I em ovários ovinos. Além disso, 50 ng/mL de IGF-I + FSH promove o desenvolvimento de folículos e de oócitos meioticamente competentes. A concentração de 50 ng/mL de GDF-9 mantém a sobrevivência de folículos primordiais cultivados in situ, aumenta a proliferação celular e diminui a apoptose através da via PI3K/AKT. Em folículos secundários isolados, o GDF-9 aumenta a percentagem de oócitos totalmente crescidos, aptos a retomar a meiose, e aumenta a atividade mitocondrial após a MIV.", publisher = {Universidade Federal Rural de Pernambuco}, scholl = {Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia (Renorbio)}, note = {Rede Nordeste de Biotecnologia} }