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Tipo do documento: Tese
Título: Perfil fenotípico de cepas típicas e recombinantes de Toxoplasma gondii (Nicolle & Manceaux, 1909) isoladas de animais de produção : infectividade, cistogênese e relação com a virulência molecular
Autor: ANDRADE, Müller Ribeiro 
Primeiro orientador: MOTA, Rinaldo Aparecido
Primeiro coorientador: PORTO, Wagnner José Nascimento
Primeiro membro da banca: PORTELA, Ricardo Wagner Dias
Segundo membro da banca: OLIVEIRA, Jaqueline Bianque de
Terceiro membro da banca: SILVA JUNIOR, Valdemiro Amaro da
Quarto membro da banca: RAMOS, Rafael Antonio do Nascimento
Resumo: Toxoplasma gondii é um protozoário intracelular obrigatório que apresenta ciclo lítico compreendido das etapas de reconhecimento, penetração, multiplicação, podendo sair da célula hospedeira ou evadir a reposta imune pelo mecanismo de encistamento, permanecendo no meio intracelular. Essas etapas influenciam na capacidade de infecção do parasito, relacionando-se com sua infectividade e, consequentemente, sua virulência. Esse trabalho visa caracterizar fenotipicamente isolados de T. gondii obtidos de tecidos de animais de produção de Alagoas, Brasil, sob o aspecto da infectividade (invasão e proliferação) e latência induzida no modelo in vitro. As provas de caracterização do comportamento biológico in vitro utilizadas foram: capacidade de conversão taquizoíto/bradizoíto, taxa de invasão e prova de proliferação. O primeiro experimento avaliou a eficiência de taquizoítos em alterar o metabolismo para o estágio de bradizoítos e foi conduzida por meio da indução por estresse exógeno (meio com pH alcalino). O teste de invasão avaliou a capacidade de penetração dos isolados em três tempos: 2h, 6h e 48h. E, por fim, a proliferação que consistiu em verificar a capacidade de multiplicação dos isolados em cultivo celular mensurado por real-time PCR. No primeiro experimento, isolados de T. gondii associados a abortamento em pequenos ruminantes e classificados como genótipo II (TgGtBrAL01, TgGtBrAL02, TgShSp1 e ME49) foram submetidos a todas as avaliações anteriormente descritas. O isolado TgShSp1 apresentou maior taxa de encistamento e menores taxas de invasão e proliferação e foi considerado de baixa infectividade. Os isolados TgGtBrAL01 e TgGtBrAL02, provenientes de um mesmo surto de abortamento em cabras, diferiram apenas na formação de cistos e apresentaram o perfil fenotípico similar nas outras provas. No segundo experimento, foi avaliada a capacidade de conversão taquizoíto-bradizoíto dos isolados de genótipo recombinante TgCkBrAL01 (#277) e TgCkBrAL03 (#114) provenientes de tecidos de galinhas; TgPigBrAL01, TgPigBrAL02 e TgPigBrAL03 (todos #114), isolados de suínos e cepas de clonais RH (tipo I) e ME49 (tipo II). Verificaram-se diferenças nas respostas de formação de cistos de isolados de genótipo recombinantes em comparação aos genótipos típicos, tendo como consequência um aumento na formação de vacúolos e diminuição das placas de lise. Ainda foi revelado que isolados de mesmo genótipo (#114) manifestam taxas de conversão distintas. No terceiro experimento, os cinco isolados de genótipo recombinante descritos acima, foram caracterizados fenotipicamente nos ensaios de invasão parasitária e proliferação intracelular. Em adicional, foi determinado o perfil dos genes ROP18 e ROP5 de dois isolados de genótipos distintos, TgPigBrAL01 (#114) e TgCkBrAL01 (#277). Os isolados de genótipo recombinantes exibiram baixa taxa de invasão e menor proliferação em relação às cepas RH e ME49, mas não apresentaram diferença entre si. Por fim, as características encontradas de baixa infectividade de dois isolados recombinantes corroboram com o padrão dos genes ROP5/ROP18 (padrão 1/3) que caracteriza um isolado avirulento ou não-letal no modelo murino. O emprego de técnicas de caracterização in vitro mostrou-se eficiente para determinar as características da infectividade que estão diretamente relacionadas com a virulência de T. gondii.
Abstract: Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan parasite that presents a lytic cycle consisted of stages of recognition, penetration, multiplication, and can leave the host cell or evade the immune response from a mechanism of encystation, remaining in the intracellular space. These stages influence the infection capacity of the parasite, relating to its infectivity and, consequently, its virulence. This work’s purpose is to characterize phenotypically isolated T. gondii from tissues of animals from Alagoas, Brazil, under the aspect of infectivity (invasion and proliferation) and latency induced in the in vitro model. The in vitro biological behavior characterization tests chosen were: tachyzoite/bradyzoite conversion capacity, invasion rate and proliferation test. The first test evaluated the efficiency of tachyzoites in altering the metabolism to a stage of bradyzoites and was conducted through exogenous stress induction (medium with alkaline pH). The invasion test evaluated the penetration capacity of the isolates in three times 2h, 6h and 48h. And, finally, the proliferation test that consisted in verifying the multiplication capacity of the isolates in cell culture measured by real-time PCR. In the first article, isolates of T. gondii associated with abortion in small ruminants and classified as genotype II (TgGtBrAL01, TgGtBrAL02, TgShSp1 and ME49) were submitted to all the evaluations previously described. The TgShSp1 isolate had a higher rate of encystation and lower rates of invasion and proliferation was considered low infectivity. The isolates TgGtBrAL01 and TgGtBrAL02, coming from the same abortion outbreak in goats, differed only in the formation of cysts and showed the similar phenotypic profile in the other tests. In the second article the tachyzoite-bradyzoite conversion capacity of the recombinant genotypes TgCkBrAL01 (#277) and TgCkBrAL03 (#114) from chicken tissues were evaluated; TgPigBrAL01, TgPigBrAL02 and TgPigBrAL03 (all #114), isolated from pigs and strains of clonal RH (type I) and ME49 (type II). Differences in cyst formation responses of recombinant genotype isolates were observed in comparison to typical genotypes, resulting in an increase in vacuoles formation and decrease in lysis plaques. It was further revealed that isolates of the same genotype (#114) show different conversion rates. In the third article, the five recombinant genotype isolates described above, are characterized phenotypically in the parasite invasion and intracellular proliferation assays. In addition, the ROP18 and ROP5 gene profiles of two isolates of different genotypes, TgPigBrAL01 (# 114) and TgCkBrAL01 (# 277), were determined. Recombinant genotype isolates had a low rate of invasion and proliferation in relation to the RH and ME49 strains but did not show any differences between them. The infectivity characteristics of two recombinant isolates corroborate with the profile ROP5/ROP18 (1/3) gene, considered to be avirulent or non-lethal in mouse. The use of in vitro characterization has shown to be able to reveal characteristics of the infectivity that are directly related to virulence of T. gondii.
Palavras-chave: Toxoplasmose
Toxoplasma gondii
Caracterização fenotípica
Área(s) do CNPq: CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA
Idioma: por
País: Brasil
Instituição: Universidade Federal Rural de Pernambuco
Sigla da instituição: UFRPE
Departamento: Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal
Programa: Programa de Pós-Graduação em Biociência Animal
Citação: ANDRADE, Müller Ribeiro. Perfil fenotípico de cepas típicas e recombinantes de Toxoplasma gondii (Nicolle & Manceaux, 1909) isoladas de animais de produção : infectividade, cistogênese e relação com a virulência molecular. 2019. 134 f. Tese (Programa de Pós-Graduação em Biociência Animal) - Universidade Federal Rural de Pernambuco, Recife.
Tipo de acesso: Acesso Aberto
URI: http://www.tede2.ufrpe.br:8080/tede2/handle/tede2/8143
Data de defesa: 22-Fev-2019
Aparece nas coleções:Doutorado em Biociência Animal

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