@PHDTHESIS{ 2018:970008034,
 	title = {Efeito do kaempferol sobre o desenvolvimento in vitro de folículos ovarianos ovinos},
 	year = {2018},
 	url = "http://www.tede2.ufrpe.br:8080/tede2/handle/tede2/8173",
 	abstract = "O objetivo deste estudo foi investigar o efeito do kaempferol sobre o cultivo in vitro de tecido ovariano e de folículos secundários isolados da espécie ovina. Para isso, foram realizadas duas fases experimentais, divididas em dois capítulos. Para o cultivo de tecido ovariano (cultivo in situ - capítulo 1), os fragmentos de córtex foram cultivados por 7 dias em meio controle (α-MEM+) ou em α-MEM+ adicionado de diferentes concentrações de kaempferol (0,1; 1; 10 ou 100 μM). O meio controle era constituído de α-MEM suplementado com insulina, transferrina, selênio, glutamina, hipoxantina, albumina sérica bovina (BSA), penicilina e estreptomicina, chamado α-MEM+. Após o cultivo, foram avaliados a morfologia, a ativação, o crescimento e a fragmentação do DNA dos folículos pré-antrais. Além disso, realizou-se a inibição farmacológica da via fosfatidilinositol-3-fosfato (PI3k) e a imunohistoquímica para análise da expressão da proteína quinase B fosforilada (pAKT). No capítulo 2, os folículos secundários foram isolados e cultivados durante 12 dias em α-MEM suplementado com BSA, insulina, glutamina e hipoxantina (α-MEM: meio base sem antioxidantes) ou neste meio também adicionado por transferrina, selênio e ácido ascórbico (AO: meio base com antioxidantes). Além disso, foram adicionadas diferentes concentrações de kaempferol (0,1; 1 ou 10 μM) aos diferentes meios de base: (α-MEM ou AO), totalizando 8 tratamentos. Após o cultivo de folículos isolados, os seguintes parâmetros foram avaliados: morfologia, formação de antro, diâmetro folicular, percentagem de oócitos ≥ 110 μm, níveis de glutationa (GSH), atividade mitocondrial e percentagem de maturação in vitro. No capítulo 1, 10 μM de kaempferol mostrou uma maior porcentagem de ativação folicular e proliferação celular do que os outros tratamentos (P <0,05) e uma porcentagem de células TUNEL positivas semelhantes às do controle fresco e menor do que outros tratamentos (P <0,05). O LY294002 inibiu significativamente a ativação do folículo primordial estimulada por α-MEM + e 10 μM de kaempferol e reduziu a expressão de pAKT. Já no capitulo 2, a porcentagem de folículos normais foi maior (P <0,05) no meio AO com relação aos demais tratamentos e similares (P> 0,05) ao α-MEM suplementado com 1 ou 10 μM kaempferol. Além disso, α-MEM mais 1 ou 10 μM de kaempferol e meio AO apresentaram diâmetros foliculares, ovócitos totalmente crescidos e níveis de GSH similares (P> 0,05). A formação de antro foi maior (P <0,05) em α-MEM + 1 μM kaempferol do que em AO e similar (P> 0,05) a α-MEM + 10 μM kaempferol. Além disso, α-MEM suplementado com 1 μM de kaempferol apresentaram maiores (P <0,05) níveis de mitocôndrias ativas do que α-MEM + 10 μM de kaempferol e meio AO. Não houve diferença para as taxas de retomada meiótica (P> 0,05). Em conclusão, 10 μM de kaempferol promove a ativação, reduz a fragmentação do DNA e aumenta a expressão de pAKT dos folículos pré-antrais ovinos cultivados in situ. Já para folículos secundários, 1 μM de kaempferol pode ser utilizado como único antioxidante presente no meio base, substituindo a adição de transferrina, selênio e ácido ascórbico durante o cultivo in vitro e a retomada meiótica de oócitos oriundos de folículos secundários ovinos.",
 	publisher = {Universidade Federal Rural de Pernambuco},
 	scholl = {Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia (Renorbio)},
 	note = {Rede Nordeste de Biotecnologia}
}