@MASTERSTHESIS{ 2018:1665001828, title = {Localização da NA+, K+-ATPase em espermatozoides ovino in natura, pós-descongelação e capacitados in vitro e determinação dos efeitos de seu bloqueio sobre as características espermáticas}, year = {2018}, url = "http://www.tede2.ufrpe.br:8080/tede2/handle/tede2/8032", abstract = "Objetivando-se localizar a Na+, K+-ATPase em espermatozoides ovinos (in natura, pós decongelação e capacitados in vitro), assim como avaliar a influência da adição da ouabaína sobre os parâmetros cinemáticos espermáticos, foram realizados dois experimentos. Exp.1: amostras de sêmen (quatro carneiros, sete repetições) foram colhidas, diluídas (Tris-gema, concentração final de 200 x 106 espermatozoides/mL) e congeladas à -196 C°. Exp. 2: amostras seminais de quatro ovinos (cinco repetições) foram diluídas em meio TALPm (50 x106 espermatozoides/mL) e aliquotadas em dois grupos: parte destinada a capacitação in vitro (adição de 2,5% de soro de ovelha em estro - SOE) ou com adição de ouabaína (10-4 M), visando o bloqueio da Na+,K+-ATPase. Alíquotas de sêmen de ambos os experimentos foram avaliadas pelo sistema CASA para análise dos parâmetros de cinemética espermática, e por meio da citometria de fluxo, para a localização da Na+, K+-ATPase (Bodipy FL Ouabaína), análise da integridade de membrana plasmática (IP) e acrossomal (FITC-PNA), viabilidade e estabilidade de membrana plasmática (YO-PRO e M540). No Exp. 2, além das análises supracitadas realizou-se também a avaliação do potencial de membrana mitocondrial (JC-1). Para o Exp. 2, todas as análises foram efetudas após 0h e 3h de incubação a 36 °C. Os resultados obtidos foram: 1) a Na+, K+-ATPase foi localizada na peça intermediária dos espermatozoides independente do status da amostra (in natura, pós descongelação e capacitados); 2) o processo de congelação/descongelação resultou em uma diminuição (P<0,05) nos parâmetros de MT, MP e VAP, um aumento no BCF, além de redução (P<0,05) no percentual de células apresentando marcação com Bodipy FL Ouabaína, com membranas plasmáticas e acrossomal íntegras, e percentagem de células com membrana plasmática estabilizada; 3) A longo do período de incubação, o bloqueio da Na+, K+-ATPase resultou na redução (P<0,05) da MP, VCL e VSL, enquanto no grupo controle observou-se redução (P <0,05) dos parâmetros MT, VCL e ALH; 4) A adição do SOE ao meio de TALPm resultou em redução (P<0,05) em MP, VCL e ALH, enquanto no grupo controle reduziu (P<0,05) os valores de MT e MP, não havendo diferença entre tratamentos para os parâmentros cinemáticos. Além disso, independentemente dos tratamentos, observou-se ao longo da incubação elevação (P<0,05) no percentual de células apresentando membrana plasmática lesionadas, acrossomal íntegra sem marcação da Na+, K+-ATPase. Em conclusão, independente do status fisiológico, a Na+, K+-ATPase não alterou sua localização, permanecendo na peça intermediária dos espermatozoides ovinos, e que, sua inibição não influenciou sobre os parâmetros de motilidade espermática.", publisher = {Universidade Federal Rural de Pernambuco}, scholl = {Programa de Pós-Graduação em Sanidade e Reprodução de Ruminantes}, note = {Unidade Acadêmica de Garanhuns} }