@PHDTHESIS{ 2017:1739422961,
 	title = {Produção, purificação e aplicação de proteases produzidas por fungos filamentosos isolados de solos da caatinga de Pernambuco},
 	year = {2017},
 	url = "http://www.tede2.ufrpe.br:8080/tede2/handle/tede2/7206",
 	abstract = "O presente estudo objetivou avaliar a produção, purificação e caracterização de proteases produzidas por fungos filamentosos isolados da Caatinga. Foram previamente utilizados 32, sendo selecionada a linhagem com maior produção de proteases em condições de cultivo em frascos agitados utilizando planejamento fatorial 23, foi avaliado influência das variáveis independentes: concentração de glicose, concentração de soja e pH. Com base nos resultados obtidos na fermentação em frascos agitados foi realizado em biorreator tipo tanque agitado de 1,5L, avaliando a influência das variáveis independentes: velocidade de agitação e aeração na produção da protease. O líquido metabólico resultante das fermentações foi utilizado nas etapas de purificação utilizando o sistema de duas fases aquosas (SDFA), métodos cromatográficos por troca iônica e gel filtração. Uma segunda protease com atividade fibrinolítica. foi utilizada e foram analisadas as propriedades em termos de coagulação, estabilidade da enzima na presença de solventes orgânicos e estrutural em diferentes pH, e atividade fibrinogenolíta. Em frascos agitados a produção máxima de protease (69,77 U/mL) foi obtida pH 6,0, 0,5% de glicose e 3% de soja, enquanto em biorreator nas condições de agitação e aeração iguais à 450 rpm e 0,5 vvm, a atividade máxima de protease foi de 61,19 U/mL após 72h de cultivo. A protease revelou uma temperatura ótima de 50°C e valores de atividade cerca de 75% quando incubada por 3h a 20, 30 e 40°C, respectivamente. A atividade enzimática foi fracamente inibida pelos íons metálicos ZnSO4 e CuSO4 e por fluoreto de fenilmetilsulfonil (PMSF), sugerindo ser uma serino protease. A protease foi parcialmente purificada a partir do sistema 24% (m/m) polietilenoglicol (PEG) 400 e 20% (m/m) citrato em pH 6, o que assegurou um fator de purificação de 1.6 e 146% de recuperação, na fase rica em (PEG). Associado o sistema a cromatografia por troca iônica e gel filtração foi possível alcançar uma purificação de 8 e rendimento de 12,5%. Quando analisado o efeito da protease fibrinolítica sobre o tempo de coagulação, observou-se no tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPa) um efeito prolongado com o passar do tempo, sugerindo uma inibição da via intrínseca.Com relação ao tempo de protrombina (TP), esse foi menos sensível a variação do tempo, mesmo em concentração enzimática elevada. A protease fibrinolítica apresentou-se mais estável na presença do solvente acetato de etila e menos estável na presença de etanol. Quando foi avaliada a atividade fibrinogenolítica ocorreu uma ação preferencial da protease fibrinolítica sobre as cadeias Aα e Bβ. A protease fibrinolítica apresentou uma desordem estrutural a valors extremos de pH. As duas enzimas fúngicas estudadas apresentam potencial para aplicação na indústria biotecnológica.",
 	publisher = {Universidade Federal Rural de Pernambuco},
 	scholl = {Programa de Pós-Graduação em Biociência Animal},
 	note = {Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal}
}